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PCR擴增儀的原理及擴增實驗中存在的問題

更新時間:2022-07-22點擊次數:3053

標簽:pcr擴增 熒光定量pcr  定量pcr  pcr儀 pcr實驗室  PCR擴增儀 基因擴增儀

PCR檢測方法有很多,其中PCR擴增儀又稱為“PCR儀",它是PCR實驗中*的實驗室設備之一。PCR儀器大致可以分為三類:即:普通PCR儀,熒光定量PCR梯度PCR原位PCR儀等 

一、PCR的原理 

在pcr擴增實驗中,PCR反應過程實質就是DNA按模板復制而發生的聚合酶鏈反應的過程,主要包括引物、dNTP、DNA靶序列、DNA聚合及PH緩沖液體系。

PCR擴增

  

PCR反應過程如下

1.通過升溫反應體系混合物一般為:94/15s-30s.使目標DNA雙螺旋的氫鍵產生斷裂從而形成單鏈DNA作為合成模板.

2反應體系冷卻至引物的TM值左右,使引物與單鏈DNA模板產生互補結合從而實現DNA的互補擴增,這一過程也被稱之為退火。

3擴增延伸

PCR擴增過程中,當反應體系的溫度高到72 ℃左右時,引物在TAQ聚合酶的作用下,以引物為起點dNTP作為底物合成新的DNA

 以上步驟重復循環,直擴增量達到基因檢測的所需要數量即可停止循環。

使用PCR擴增儀進行PCR反應過程中常見的問題:

無明顯的擴增條帶

這種情況主要是由于以下情況產生: 

1Taq酶失活或Taq酶活性加入量少所造成DNA聚合Taq酶的保存溫度一般在-20℃環境下,盡量避免反復凍融所產生的影響。

2混合模板反應體系中如果含有甲酸、甲醛等雜質也會對DNA鏈上的堿基造成影響,降低PCR擴增效果。

3PCR儀的各反應階段適宜溫度設定也很重要,過高或低的反應溫度,都會使DNA聚合酶產生失活。

4引物設置不合理或反應系統中蛋白酶及核酸酶,這些因素也同樣會影響到DNA的合成與產出。

 5另外,PCR循環數不足或者延伸擴增時間短也會影響到PCR產物產量。

PCR擴增

蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司13年專注生物實驗室儀器設備和試劑耗材 的綜合供應包括PCR擴增儀、熒光定量PCR 、PCR檢測儀、振蕩培養箱、生物發酵罐、移液器等 ,廣泛應用于生命科學、生物制藥、防疫檢測 、 科研等領域;以服務取勝,以高性價比吸睛,阿爾法從售前到售后,打造實驗室儀器設備全服務鏈體系,滿足客戶應用需求。


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