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實例應用-如何計算DNA片段中的分子數

更新時間:2022-05-18點擊次數:3170

實驗室數學在生物學實驗數據分析中一直是一個令人頭疼的問題?在定量PCR實驗中,常常會遇到計算 DNA 片段中的分子、計算溶液的濃度或計算連續稀釋等,這樣的計算有沒有什么好的方法呢?

當然有了,在本文中,我們將教你簡單的 DNA 樣本中的分子計數法。

——例如,套入公式即可一招輕松拆解:500 ng 樣本中有多少個 50 堿基對 (bp) 片段的模板 /副本這樣的棘手問題。使您很快就會成為實驗室中的計算高手!

一、計算 DNA片段中分子數量的應用

在進行以下類型的實驗時,通常需要DNA分子的計算

DNA 連接。

生化分析。

實時 PCR(絕對定量)。

測量載體基因組的數量。

二、分子數計算公式的原理

我們知道,單個 DNA bp 的平均重量為 650 道爾頓。這也可以寫為 650 g/mol摩爾質量)。因此,任何雙鏈 DNA 片段的分子量或摩爾質量都可以通過將其長度(以 bp 為單位)乘以 650來計算,答案將表示為道爾頓或 g/mol。

只要我們知道序列長度(即基因組的長度/大?。擞嬎銓⑦m用于任何物種的基因組 DNA。

三、實例與應用:

1.實例問題: 5.2-kb 質粒的分子量是多少?記住 5.2 kb = 5200 bp

計算: 5200 bp x 650 道爾頓 = 3,380,000 道爾頓或 g/mol

現在我們知道如何計算 DNA 模板的分子量了。使用阿伏伽德羅數,即 6.022 x 10 23分子/摩爾,可以使用以下公式計算每模板的分子數:

計數

2.實例問題:您有 300 ng 的 5.2-kb 質粒。你的質粒有多少 拷貝

分數 

3.實例問題:您有 50 ng 的 20-bp 引物。你的引物有多少份?

引物份數

4.實例問題:您有 150 ng 的 670 bp 純化 PCR 產物,你有多少份 PCR 產物?

 

注意:此公式基于您使用的是單一 DNA 物種的假設,因此在應用于 PCR 產物或質粒時,請確保您只有 個條帶或您有干凈的質粒小量制備。

所以實驗中,只要知道 DNA 片段的長度和以納克為單位的濃度,您就可以輕松應用該公式來獲得任何類型的 DNA 樣本中的拷貝數。

四、其他分子量計算常用的公式

分子量計算

DNA分子量計算

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